Een eiwit-tag, ook wel affinity tag genoemd, is een korte peptide- of aminozuursequentie die in de moleculaire biologie kunstmatig wordt toegevoegd aan een eiwit van interesse. Dit gebeurt meestal op DNA-niveau in een vector, door simpelweg een korte sequentie toe te voegen, zodat het eiwit met de tag samen wordt geproduceerd in een cel. Het doel van een tag is om het eiwit gemakkelijk te kunnen detecteren, zuiveren, of bestuderen. Sommige tags helpen om eiwitten beter oplosbaar of stabieler te maken tijdens expressie in bijvoorbeeld bacteriën.
Sommige tags kunnen worden herkend door zeer specifieke monoklonale antilichamen (epitope tags). Het antilichaam kan dan gebruikt worden om het eiwit te zuiveren door affiniteitschromatografie of immunoprecipitatie, of te visualiseren door bijvoorbeeld western blot of microscopie. Andere tags zijn speciaal ontworpen voor eiwitzuivering, zoals de his-tag. Deze tag bestaat uit een herhaling van 6 of meer histidine-aminozuren die zich kunnen binden aan metaalionen (zoals nikkel). Door deze korte sequentie toe te voegen aan het uiteinde van een eiwitsequentie, kan het nauwelijks gemodificeerde eiwit selectief worden vastgehouden op een affiniteitskolom met geïmmobiliseerde nikkelionen.
+ Veelgebruikte eiwit-tags in de moleculaire biologie Tag Grootte Eigenschappen en toepassingen His-tag (6xHis) ~0,8 kDa Bindt aan nikkel- of kobaltchelaten; veelgebruikt voor eenvoudige eiwitzuivering FLAG-tag ~1 kDa Klein, hydrofiel peptide; herkend door specifieke monoklonale antilichamen HA-tag ~1 kDa Afgeleid van het hemagglutinine-eiwit van het influenzavirus Myc-tag ~1,2 kDa Afgeleid van het c-Myc oncoproteïne; herkend door veelgebruikte antilichamen Strep-tag ~1 kDa Bindt specifiek aan streptavidine-kolom; milde eluatiecondities GFP-tag ~27 kDa Groene fluorescerende proteïne; geschikt voor fluorescentiemicroscopie en live-cell imaging HaloTag ~33 kDa Enzymatische tag; bindt aan chlooralkaan; breed inzetbaar
Een tag kan soms (ondanks zijn geringe lengte) de functie of structuur van het eiwit verstoren. Daarom wordt vaak getest of de tag beter aan de N-terminus of C-terminus geplaatst kan worden, of zelfs verwijderd kan worden na zuivering (middels een knipplaats zoals een thrombine-herkenningssite).
Zie ook Genetische technologie Proteomica
Categorie:Eiwitchemie