thumb|Microscopische time-lapse opname van kankercellen in kweek. Fluorescent-gelabelde eiwitten visualiseren het verloop van de celcyclus
Live-cell imaging is een verzamelnaam voor microscopische technieken waarmee levende cellen over een bepaalde tijdsperiode waargenomen worden. Dit stelt onderzoekers in staat om dynamische processen in intacte cellen te volgen, zoals celdeling, intracellulair transport en celmigratie. Dit is anders dan in conventionele microscopie, waar het preparaat meestal eerst gefixeerd wordt.
Deze vorm van microscopische beeldvorming wordt voornamelijk uitgevoerd via fluorescentiemicroscopie, confocale microscopie, of bepaalde superresolutietechnieken. Fluorescente eiwitten zoals GFP worden gebruikt om specifieke eiwitten of andere structuren zichtbaar te maken. Ook worden kleurstoffen gebruikt om bijvoorbeeld calciumionen, membraanpotentiaal of compartimentvorming in cellen te meten. De processen duren vaak minuten tot uren, waardoor vaak wordt gekozen voor time-lapse-opnamen.
Principe Veel klassieke microscopie gebeurt op chemisch gefixeerde cellen of weefsels, omdat dit technisch eenvoudiger is (en een hoge resolutie geeft). Het is de standaardwijze voor bijvoorbeeld immunokleurings-assays (IFA), elektronenmicroscopie en histologisch onderzoek. Een gefixeerd preparaat is slechts een momentopname: het geeft weinig informatie over de dynamische intracellulaire processen. Live-cell imaging is voor verschillende onderzoeksdoeleinden belangrijk geworden, onder meer in het kankeronderzoek.
Omdat levende cellen gevoelig zijn voor licht, temperatuurveranderingen en chemische kleurstoffen, vereist live-cell imaging nauwkeurige experimentele omstandigheden. Tijdens observatie worden cellen doorgaans levend gehouden in incubatiekamers met stabiele temperatuur, luchtvochtigheid en CO2-concentratie. Een belangrijk aandachtspunt tijdens opnames is fototoxiciteit: langdurige blootstelling aan intens licht kan cellulaire schade veroorzaken en biologische processen beïnvloeden.
Referenties
Categorie:Microscoop Categorie:Celbiologie